Investigación sobre el aislamiento e identificación de la enfermedad de la mancha negra de Rosa chinensis en Kunming, China

Oct 24, 2023

Scientific Reports volumen 13, Número de artículo: 8299 (2023) Citar este artículo

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Detalles de métricas

A través de una encuesta de enfermedades de rosas en el Jardín Tropical Sur en Kunming, China, se encontró que la mancha negra era la enfermedad más común y grave de las rosas cultivadas al aire libre allí, con una incidencia de más del 90%. En este estudio, el aislamiento de hongos se realizó en muestras de hojas de cinco variedades de rosa susceptibles a la mancha negra del South Tropical Garden mediante aislamiento de tejido. Inicialmente se obtuvieron 18 cepas de hongos, y siete de ellas fueron finalmente identificadas como causantes de síntomas de manchas negras en hojas sanas de rosa después de la verificación mediante la regla de Koch. Mediante la observación de la morfología de colonias y esporas, y la construcción de un árbol filogenético mediante la combinación de biología molecular y múltiples genes, se identificaron dos hongos patógenos, a saber, Alternaria alternata y Gnomoniopsis rosae. G. rosae fue el primer hongo patógeno de la mancha negra de la rosa aislado e identificado en este estudio. Los resultados de este estudio pueden proporcionar una base de referencia para futuras investigaciones y el control de la enfermedad de la mancha negra de la rosa en Kunming.

La rosa es una de las flores más famosas y populares, China es el lugar de nacimiento de la Rosa chinensis. Se extendió desde la Ruta de la Seda hasta Persia, Ceilán y otros países antes del siglo XII, y fue muy elogiada y amada en el extranjero como un especies endémicas para el intercambio cultural1. En China, varias ciudades definen a la rosa como la flor de la ciudad y se usa ampliamente en el paisajismo urbano, pero en el proceso de plantación y crecimiento, es vulnerable a enfermedades e insectos, lo que resulta en un crecimiento deficiente, caída de hojas, marchitamiento e incluso muerte, que afecta la planta ornamental y reduce el valor económico de la rosa misma2. Hay diez especies reportadas de enfermedades de las rosas, de las cuales siete son fúngicas: mildiu polvoroso, mancha negra, mildiú velloso, moho gris, moho de la hoja, roya y el tizón de la rama, respectivamente, entre ellos, la mancha negra es la más grave y se ha convertido en una enfermedad mundial, que se presenta comúnmente en la mayoría de las áreas de cultivo de rosas, especialmente en el cultivo a campo abierto con una incidencia muy alta3.

La mancha negra de la rosa se informó por primera vez en Suecia en 18154. En la actualidad, la enfermedad de la mancha negra de la rosa ocurre en todas partes del mundo y se ha convertido en un problema importante que debe resolverse con urgencia en la producción de rosa. Según estudios previos, hay dos especies de patógenos que causan la mancha negra en la rosa: una es Marssonina rosae y la otra es Alternaria sp.5. Abbas informó por primera vez en Pakistán que el hongo patógeno que causa la mancha negra de la rosa era principalmente Alternaria sp. .6.En 2013, Xu et al. recolectó 15 muestras de hojas de rosas con síntomas típicos de manchas negras en Xi'an, Xianyang, Baoji y Weinan, e identificó los hongos patógenos que infestan las manchas negras como Marssonina rosae después del aislamiento y la purificación7. Feng et al. recolectaron hojas enfermas de rosa con síntomas de mancha negra en el jardín de Yuncheng College, después de la identificación morfológica y el análisis filogenético molecular, el hongo patógeno que causó la mancha negra de la rosa fue Alternaria alternata8.

El objetivo de este estudio fue identificar con precisión dos hongos patógenos aislados de las hojas enfermas de manchas negras de cinco variedades de rosas en el Jardín Tropical Sur en Kunming, China, a través de la identificación morfológica y el análisis filogenético de biología molecular combinado con la determinación de la patogenicidad, que puede proporcionar una base teórica para la investigación posterior sobre las características biológicas de los patógenos de la mancha negra de la rosa o para el control efectivo de la enfermedad de la mancha negra de la rosa en el futuro.

En noviembre de 2021, hicimos una encuesta sobre las enfermedades de las rosas en cuatro áreas del South Tropical Garden en Kunming, China, que cubre un área de aproximadamente 5 acres. Los síntomas de estas enfermedades de la mancha negra son similares. Se recolectaron cincuenta muestras de hojas de cinco variedades de rosas ("Red Leonardo da Vinci", "Sweet Pretty", "Happy Carefree", "Benita" y "Home run") con síntomas evidentes de mancha negra (se recolectaron diez muestras para cada variedad ), y llevado de vuelta al laboratorio para su almacenamiento a 4 ℃ en el refrigerador. Cinco variedades de rosas se infectaron gravemente con la mancha negra y la incidencia de cada variedad fue superior al 80 %.

Medio: medio de agar papa dextrosa (PDA): papa 200 g, glucosa anhidra 20 g, agar 17–20 g, agua destilada 1 L.

Reactivos: Sangon Biotech Rapid Fungi Genomic DNA Isolation Kit, cebadores de PCR (ITS1/ITS4, NS1/NS4, LSU1Fd/LR5, EF1-728F/EF1-986R, T1/T2), 2× Taq PCR Mix, colorantes de ácido nucleico, ADN Marcador DL2000, 5xTAE, etc.

Instrumentos: microscopio óptico, autoclave, baño de metal a temperatura constante, centrífuga a baja temperatura, instrumento de PCR, instrumento de electroforesis de imágenes en gel, incubadora de temperatura y humedad constantes, etc.

El aislamiento de tejidos9 se usó para aislar muestras de hojas de rosas con síntomas evidentes de mancha negra. Después de enjuagar las hojas de rosas enfermas, use un bisturí esterilizado para cortar trozos de tejido de 3 × 3 mm en la unión de las hojas enfermas y sanas en el banco ultralimpio, luego coloque estos tejidos en una solución de hipoclorito de sodio al 1% (5 s), alcohol al 75% (30 s), finalmente enjuagar con agua estéril tres veces, colocar sobre papel filtro esterilizado, secar y luego inocular en medio PDA con fórceps. Se inocularon tres bloques de tejido en cada placa de Petri, se marcaron con número y fecha en la tapa, se sellaron y se incubaron en una incubadora de temperatura y humedad constante a 25 ℃. Se utilizaron tres grupos de controles paralelos para cada experimento. Después de 2 días, las colonias se cultivaron e inmediatamente se purificaron, después de la purificación 2 o 3 veces para obtener un cultivo puro, inocularlo en un tubo de ensayo PDA inclinado, colocarlo en una incubadora a temperatura constante de 25 ℃ para esperar a que las colonias crezcan llenas de medio, poner en el refrigerador a 4 ℃ para ser refrigerado.

Inoculación de hojas ex vivo: se recolectaron hojas sanas de cinco variedades de rosas ("Red Leonardo da Vinci", "Sweet Pretty", "Happy Carefree", "Benita" y "Home run") del South Tropical Garden en Kunming, China en Mayo de 2022. Las hojas sanas de rosal se enjuagaron con agua del grifo, luego se desinfectaron con alcohol al 75% durante 30 s, luego se enjuagaron con agua estéril tres veces y se colocaron sobre papel de filtro estéril para secar. Los bloques fúngicos se perforaron en el borde de las colonias con un punzón esterilizado de 5 mm de diámetro y se reservaron. Se colocaron dos capas de papel filtro estéril en una placa Petri de 9 cm de diámetro y se humedecieron con agua estéril, sobre el papel filtro se colocaron las hojas sanas de rosa esterilizadas, se colocó una hoja compuesta en cada placa Petri, se realizaron heridas mínimamente invasivas en la hojas pequeñas con un bisturí esterilizado, luego se inoculó un bloque de micelio de 5 mm en la herida y el sitio de inoculación se cubrió con una bola de algodón húmedo estéril, tres hojas pequeñas se trataron con cada hoja compuesta y una inoculación de control (inoculada con un 5 mm de diámetro del bloque PDA) y cada grupo experimental se repitió tres veces. Después de la inoculación, las cajas de petri se sellaron con film transparente y se colocaron a temperatura ambiente, cuando aparecieron los síntomas en las hojas, se registraron y fotografiaron de inmediato.

Inoculación en hojas vivas: se seleccionaron las variedades correspondientes de esquejes de rosa con un tamaño de hoja relativamente constante, y las superficies de hojas de rosa sanas se desinfectaron primero con bolas de algodón descremadas sumergidas en alcohol al 75%, luego las hojas se sumergieron en agua estéril y se limpiaron tres veces, y las partes a inocular se pincharon con agujas de inoculación estériles, luego se inoculó un bloque de micelio de 5 mm sobre la herida y el sitio de inoculación se cubrió con un algodón húmedo estéril, se trataron tres repeticiones por cada variedad de rosa, tres pequeños las hojas fueron tratadas para cada hoja compuesta, y establecieron inoculación de control (inoculadas con un bloque de PDA de 5 mm de diámetro), y cubrieron las hojas compuestas enteras inoculadas con bolsas de plástico, observaron y registraron diariamente y rociaron agua para humedecer las hojas inoculadas. Después de que aparecieron los síntomas, registrados y fotografiados inmediatamente.

De acuerdo con la regla de Koch, los tejidos de las hojas de rosa en la unión de los enfermos y los sanos se tomaron para aislarlos y purificarlos nuevamente, las cepas reaisladas se compararon con las cepas originales y se usó el mismo método de identificación que las cepas originales para probar. si eran consistentes con el hongo patógeno original.

El hongo patógeno de la mancha negra de la rosa se inoculó en medio PDA y se incubó a 25 ℃ durante 7 a 10 días. Se observaron y registraron la morfología, el color y la tasa de crecimiento de la colonia. Los portaobjetos se prepararon recogiendo el micelio con una aguja de inoculación, y las características morfológicas como el micelio, el color, la estructura productora de esporas y las conidias se observaron bajo el microscopio óptico y se fotografiaron y registraron.

El hongo patógeno se inoculó en medio PDA y se incubó durante 7 días, después de que el micelio había crecido en todas las placas, se extrajo el ADN genómico total de las cepas de prueba y se realizó la amplificación por PCR utilizando los cebadores universales fúngicos ITS (ITS1/ITS4). , SSU(NS1/NS4), LSU(LSU1Fd/LR5), TEF(EF1-728F/EF1-986R) y TUB(T1/T2) (Tabla 1). El sistema de reacción se muestra en la Tabla 2; el procedimiento de reacción de amplificación por PCR se muestra en la Tabla 3. Los productos de PCR amplificados se detectaron por electroforesis en un gel de agarosa al 1% y, si había bandas simples y claras, se enviaron a Biotech Bioengineering Ltd. para su secuenciación. Los resultados de la secuenciación se analizaron mediante comparación de secuencias en el sitio web del NCBI utilizando la herramienta BLAST, y con referencia a Muhammad Farhan10 y Ning Jiang11, las secuencias conocidas con alta homología en GenBank se buscaron en línea como cepas modelo. Basado en las secuencias de múltiples combinaciones de genes de rDNAITS, SSU, LSU, TEF1 y LSU, el árbol filogenético se construyó usando el método de Máxima Verosimilitud usando el software MEGA11.0 para analizar el parentesco de las cepas patógenas de rosa de la mancha negra con el modelo cepas y finalmente determinar su estatus taxonómico12,13.

Los estudios experimentales y la investigación de campo sobre plantas (cultivadas o silvestres), incluida la recolección de material vegetal, deben cumplir con las directrices y leyes institucionales, nacionales e internacionales pertinentes. Cumpliremos estrictamente con la Declaración de política de la UICN sobre la investigación de especies en peligro y la Convención sobre el comercio de especies en peligro de fauna y flora silvestres. Todos los especímenes se recolectaron con permiso de South Tropical Garden, Kunming. Confirmamos el cumplimiento de la política de la UICN para plantas.

A través de la encuesta sobre la enfermedad de las rosas en el Jardín Tropical Sur en Kunming, China, se encontró que la mancha negra era la más extendida y grave, con una incidencia que superaba el 90%. Los patógenos de la mancha negra infectan principalmente las hojas de la rosa (Fig. 1). Al comienzo de la enfermedad, aparecen manchas marrones en el anverso de las hojas, luego las manchas se expanden gradualmente a redondas o irregulares, son de color marrón púrpura a marrón oscuro; Al final de la enfermedad, el tejido alrededor de las manchas se vuelve amarillo, las hojas inferiores y medias de la planta se caen, dejando solo las hojas superiores.

Síntomas de campo y hojas enfermas de mancha negra de rosa (esta imagen fue tomada por Yanjie Li).

Se aislaron y purificaron dieciocho cepas de hongos de muestras de hojas enfermas de cinco especies de rosas diferentes ("Red Leonardo da Vinci" se aisló 4, "Sweet Pretty" se aisló 5, "Happy Carefree" se aisló 4, "Benita" se aisló 2 y se aisló "Home run" 3), estos hongos pertenecen principalmente a los géneros Gnomoniopsis, Alternaria y Nigrospora después de la extracción de ADN, la amplificación y secuenciación de ITS, y la comparación preliminar en NCBI. Todos los hongos fueron inoculados por separado en las hojas de rosas sanas ex vivo en el laboratorio, y algunas de las hojas comenzaron a mostrar síntomas alrededor de los 5 días, entre las cuales las hojas de rosas sanas inoculadas con las cepas de Alternaria y Gnomoniopsis sp. mostró los síntomas más evidentes (Cuadro 4), mientras que las otras cepas casi no mostraron síntomas en las hojas ex vivo después de 7 días de la inoculación. TMR3-3 (aislado de "Sweet Pretty") del género Gnomoniopsis y KLWY1-6-2 (aislado de "Happy Carefree") del género Alternaria, que causaron la mancha negra ex vivo, se seleccionaron hojas de rosas sanas como cepas representativas para inoculación en hojas vivas, y los síntomas de mancha negra aparecieron en las hojas alrededor de los 7 días (Cuadro 5). Las partes patógenas de las hojas de rosas inoculadas se aislaron nuevamente y se utilizó el mismo método de identificación que las cepas originales. Las cepas finales obtenidas podrían corresponder todas a las cepas originales, por lo que TMR1-1-2, HSDFQ3-7-1, HSDFQ2-4, DDBX2-13, KLWY1-6-2; XP1-6, TMR3-3 son hongos patógenos que infestan la mancha negra de la rosa.

Cinco cepas: TMR1-1-2 (aislado de "Sweet Pretty"), HSDFQ3-7-1、HSDFQ2-4 (aislado de "Red Leonardo da Vinci"), DDBX2-13 (aislado de "Benita"), KLWY1- 6-2 (aislado de "Happy Carefree") de Alternaria sp. se incubaron en medio PDA a 25 °C durante 7 a 10 días. La morfología y el color eran consistentes, las colonias iniciales eran de color blanco grisáceo en el frente, luego se volvían gradualmente de color marrón grisáceo y marrón negruzco en la parte posterior, y las colonias crecían en toda la placa de Petri durante aproximadamente 10 días (Fig. 2A, B) . Se seleccionó DDBX2-13 como una cepa representativa y se observó bajo el microscopio, las conidias eran encadenadas, ovadas, en forma de pera invertida o clavadas invertidas, parduscas, con 0–3 septos longitudinales, 2–5 septos transversales, ligeramente estrechados en la separación , individuo con pico columnar corto, el tamaño de las esporas fue (12,1–41,0) μm × (7,0–19,0) μm; pedúnculo conidial erecto o curvo, cespitoso, ramificado; el micelio era vigoroso y velutino, incoloro, no septado y de aproximadamente (2.1–3.0) μm de diámetro (Fig. 2C, D). Estos hongos patógenos fueron inicialmente identificados como del género Alternaria en base a características morfológicas14. Dos cepas de hongos: XP1-6 (aislado de "Home run"), TMR3-3 (aislado de "Sweet Pretty") del género Gnomoniopsis se cultivaron a una temperatura constante de 25 ℃ en medio PDA, y las características morfológicas también fueron coherente. Crecieron en un anillo, el micelio inicial es de color blanco puro, luego el anillo interior del micelio se vuelve gradualmente de color verde grisáceo, el anillo del medio es de color verde claro, el anillo exterior es de color blanco grisáceo; luego la colonia en su conjunto es de color verde grisáceo, el micelio aéreo es escaso, y finalmente toda la colonia tiene forma de anillo y produce una gran cantidad de conidióforos con bases de color verde grisáceo a negro, el conidio es amarillento cuando se desborda; (Fig. 3A, B); el conidio es fusiforme, transparente sin tabique, la superficie es lisa, con gotitas, con gotitas, esporas (7,5–10 × 3,5–4) μm; Las células productoras de esporas son de tallo embotellado o claviforme, degeneradas del pedúnculo conidial, transparentes, lisas, con la punta más fina que la base (Fig. 3C, D).

Morfología de colonias y esporas de Alternaria alternata. A. alternata crece en medio PDA durante 7 días ((A) adelante, (B) atrás). Se cultivó ascocarpio bajo microscopio anatómico durante 7 días (C, D).

La morfología de colonias y esporas de Gnomoniopsis rosae G. rosae crece en medio PDA durante 7 días ((A) frente, (B) atrás). Ascocarp bajo microscopio anatómico se cultivó durante 7 días (C, D).

El ADN genómico de cinco cepas del género Alternaria (TMR1-1-2, HSDFQ3-7-1, HSDFQ2-4, DDBX2-13, KLWY1-6-2) se amplificó por PCR utilizando los cebadores universales fúngicos ITS1/ITS4, NS1 /NS4, LSU1Fd/LR5; mientras que dos cepas del género Gnomoniopsis (XP1-6, TMR3-3) fueron amplificadas utilizando los cebadores ITS1/ITS4, EF1-728F/EF1-986R y T1/T2. Las bandas únicas y claras se obtuvieron después de la detección electroforética en geles de agarosa al 1%. Los productos de amplificación por PCR anteriores se enviaron a la sucursal de Kunming de Beijing DynaScience Biotechnology Co., Ltd. para la secuenciación, y los resultados de la secuenciación se cargaron en el sitio web del NCBI para obtener los números de registro (Figs. 4, 5). El árbol filogenético se construyó utilizando el método de máxima verosimilitud con el software MEGA11.0 y los resultados mostraron que las cepas: DDBX2-13, KLWY1-6-2, HSDFQ3-7-1, TMR1-1-2 y HSDFQ2-4 se agruparon en una rama con Alternaria alternata (Fig. 4); XP1-6, TMR3-3 agrupados en una rama con Gnomoniopsis rosae (Fig. 5). Finalmente, combinado con la identificación de las características morfológicas, Alternaria alternata y Gnomoniopsis rosae fueron identificadas como el hongo patógeno de la mancha negra de la rosa.

El árbol filogenético de máxima verosimilitud del conjunto de datos combinados LSU, SSU e ITS de Alternaria alternata y sus especies relacionadas cerradas (los números de accesión de los genes LSU, SSU e ITS se muestran entre paréntesis en ese orden).

El árbol filogenético de máxima verosimilitud del conjunto de datos combinados TEF1, TUB e ITS de Gnomoniopsis rosae y sus especies relacionadas cerradas (los números de acceso de los genes TEF1, TUB e ITS se muestran entre paréntesis en ese orden).

En este estudio, se aislaron dieciocho cepas fúngicas morfológicamente distintas de las muestras de hojas con mancha negra de cinco variedades de rosas ("Red Leonardo da Vinci", "Sweet Pretty", "Happy Carefree", "Benita" y "Home run"), mediante identificación morfológica, identificación por biología molecular combinada con la regla de Koch, se obtuvieron un total de siete cepas patógenas de la mancha negra. El micelio, la estructura productora de esporas, las conidias y otras estructuras de estas siete cepas patógenas se observaron morfológicamente bajo un microscopio de 40x; el ADN patógeno se extrajo y secuenció mediante amplificación PCR utilizando los cebadores universales fúngicos ITS, SSU, LSU, TEF1 y TUB, y el árbol filogenético se construyó mediante comparación de secuencias NCBI y descargando el patrón de asociación multigénica de cepas en GenBank, y finalmente TMR1 -1-2, HSDFQ3-7-1, HSDFQ2-4, DDBX2-13 y KLWY1-6-2 fueron identificados como Alternaria alternata; XP1-6 y TMR3-3 se identificaron como Gnomoniopsis rosae.

La mayoría de los resultados de estudios previos sobre la enfermedad de la mancha negra de la rosa mostraron que el hongo patógeno era Marssinina rosae, que era diferente de los resultados de nuestra investigación. Peihong fang et al. encontró que el hongo patógeno de la mancha negra de la rosa era Alternaria sp, en placas de PDA, las colonias comenzaron como de color blanco grisáceo y gradualmente se volvieron negras o marrones, y las conidias eran septadas, ovadas, en forma de pera o en forma de bastón15, lo cual era consistente con la morfología de A. alternata en este estudio. El otro hongo patógeno, Gnomoniopsis rosae, aislado e identificado en este estudio, no ha sido reportado en la mancha negra de la rosa. La razón de esto puede deberse a las diferentes ubicaciones geográficas y condiciones climáticas de las diferentes variedades de rosas cultivadas en diferentes regiones, por lo que hay también existen diferencias en las especies de patógenos de la mancha negra.

G. rosae fue reportada por primera vez como una nueva especie de registro en China por Ning Jiang et al.16, quienes también informaron que la rosa era un nuevo registro de hospedante para G. rosae. Sin embargo, fue diferente de nuestra investigación, G. rosae fue aislada de ramas sanas de la rosa por Ning Jiang et al. y utilizado como hongo endófito para estudios posteriores de identificación y caracterización de especies del género Gnomoniopsis. En este estudio, se aisló G. rosae de las muestras de hojas con mancha negra de dos variedades de rosas ("Sweet Pretty" y "Home run", las cuales fueron verificadas por la regla de Koch e identificadas por morfología y biología molecular, y finalmente identificadas como la hongos patógenos de la enfermedad de la mancha negra de la rosa.Los huéspedes del hongo de la Gnomoniopsis spp.son principalmente plantas de las familias Crustaceae y Rosaceae, y se han informado 25 especies de Gnomoniopsis, de las cuales diez especies se distribuyen en China, nueve especies han sido reportado en plantas de la familia Crustaceae, y uno ha sido reportado en R. chinensis de la familia Rosaceae 11. Varias especies dentro de Gnomoniopsis spp., han sido reportadas como importantes patógenos de plantas 17,18. mancha y pudrición sólida del castaño chino19,20, Gnomoniopsis fragariae causó la enfermedad de la mancha foliar de la fresa21, Gnomoniopsis chinensis causó la enfermedad ulcerosa grave del castaño en Hebei, causando graves pérdidas económicas a nivel local22, Gnomoniopsis clavulata causó la mancha foliar del roble blanco y el muérdago rojo en América del Norte23 , Gnomoniopsis smithogilvyi causó una grave pudrición sólida del castaño europeo en Europa, Australia e India24,25,26.

En este estudio, se identificó un nuevo hongo patógeno de la mancha negra de la rosa: Gnomoniopsis rosae, que pertenece al filo Ascomycota, orden Diaporthales, familia Gnomoniaceae y género Gnomoniopsis, para la mancha negra de la rosa. Este es el primer informe de G. rosae que causa la mancha negra de R. chinensis. Los resultados de la identificación pueden proporcionar una base de referencia para futuras investigaciones y el control de la mancha negra de la rosa (Información complementaria).

Los datos que respaldan los hallazgos de este estudio están disponibles abiertamente en el material complementario de este artículo.

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Este estudio fue apoyado por Key Laboratory Forest Resources Conservation and Utilization in the Southwest Mountains of China, Ministerio de Educación; Laboratorio clave de alerta y control de desastres forestales en universidades de la provincia de Yunnan, Universidad Forestal del Suroeste. y fue apoyado por el Programa Nacional Clave de I+D de China (2018YFD1000407); la Fundación de Investigación Científica del Departamento de Educación de la Provincia de Yunnan (Subvención No. 2023Y0749).

Centro de investigación de ingeniería de la provincia de Yunnan para la industrialización y los recursos florales funcionales, Centro de investigación del suroeste para la ingeniería de la arquitectura del paisaje (Administración estatal de silvicultura y pastizales), Provincia de Yunnan Asia meridional y sudoriental Centro conjunto de I+D de la industria forestal económica Cadena completa Laboratorio clave de alerta y control de desastres forestales en Universidades de la provincia de Yunnan, Universidad Forestal del Suroeste, Kunming, 650224, Yunnan, China

Yanjie Li, Meiying Pu, Yusi Cui, Ju Gu, Xi Chen, Louqin Wang y Chao Wang

Facultad de Paisajismo y Horticultura, Universidad Agrícola de Yunnan, Kunming, 650201, China

Hongzhi Wu

Kunming Yang Chinese Rose Gardening Co., Ltd, Kunming, 650503, Yunnan, China

yu yong yang

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Todos los autores revisaron el manuscrito.

Correspondencia a Chao Wang.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Reimpresiones y permisos

Li, Y., Pu, M., Cui, Y. et al. Investigación sobre el aislamiento e identificación de la enfermedad de la mancha negra de Rosa chinensis en Kunming, China. Informe científico 13, 8299 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-35295-1

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Recibido: 21 diciembre 2022

Aceptado: 16 mayo 2023

Publicado: 23 mayo 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-35295-1

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