Aumento de la productividad de la reacción IVT mediante cromatografía HPLC

Jun 15, 2023

Esto nos bcast características:Rok Sekirnik, PhD, Jefe de Desarrollo de Procesos mRNA/pDNA, BIA Separations, ahora una empresa de Sartorius.

Las reacciones de transcripción in vitro (IVT) normalmente se realizan como procesos por lotes. Teniendo en cuenta su base catalítica, es posible ampliar los tiempos de reacción y los rendimientos mediante la adición continua de reactivos consumidos a la mezcla de reacción. Sin embargo, las estrategias de alimentación por lotes reportadas hasta la fecha solo han logrado lograr un aumento del 40 al 100% en la producción de ARNm. Una de las principales limitaciones del desarrollo ha sido el bajo rendimiento de análisis para la cuantificación de precursores de ARNm y NTP; la productividad se determina normalmente como una medida de punto final de la concentración de ARNm.

En este seminario web, analizaremos un método analítico basado en HPLC que utiliza un ligando multimodal basado en ligando de enlace de hidrógeno/intercambio de aniones (PrimaS) para monitorear la reacción de IVT, que permite la cuantificación simultánea de NTP, reactivo de protección, plásmido y ARNm. en 3,5 min.

Cuando se aplica para monitorear la reacción IVT, un enfoque por lotes con una productividad promedio de 3-5 mg/mL se puede convertir en un lote alimentado que produce 10-12 mg/mL. Se demostrarán dos enfoques para controlar la reacción IVT, uno que se centra en la productividad del ARNm sin caperuza, otro en la productividad del ARNm con caperuza, lo que requiere un control preciso de la relación NPT:reactivo de caperuza.

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